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科研技術(shù)服務(wù)
【實(shí)驗(yàn)原理】
流式細(xì)胞術(shù)(flow cytometry, FCM)是一項(xiàng)新型的、發(fā)展迅速的生物醫(yī)學(xué)分析技術(shù),它是集激光技術(shù)、光電測(cè)量技術(shù)、計(jì)算機(jī)技術(shù)、流體力學(xué)以及細(xì)胞免疫熒光化學(xué)技術(shù) 、單克隆抗體技術(shù)為一體的新型高科技細(xì)胞分析技術(shù)。
流式細(xì)胞儀使細(xì)胞或微粒在液流中流動(dòng),逐個(gè)通過一入射光束,并用高靈敏度檢測(cè)器記錄下散射光及各種熒光信號(hào),從而得以對(duì)粒子進(jìn)行多參數(shù)分析,包括諸如粒子形狀和大小、細(xì)胞周期、細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子、細(xì)菌表面抗原、細(xì)胞DNA內(nèi)含物等。FCM檢測(cè)的粒子一般為活性細(xì)胞,通過激光光源激發(fā)細(xì)胞上所標(biāo)記的熒光物質(zhì)的強(qiáng)度和顏色以及散射光的強(qiáng)度可以得到細(xì)胞內(nèi)部各種各樣的生物信息。另外FCM還可進(jìn)行細(xì)胞分選,可以根據(jù)所檢測(cè)細(xì)胞的某種性質(zhì)進(jìn)行分選,并且如果分選的過程是在無菌條件下進(jìn)行的,這些細(xì)胞還可以用來培養(yǎng)。
【應(yīng)用簡(jiǎn)介】
醫(yī)學(xué)應(yīng)用
1. HIV免疫分型，CD4絕對(duì)計(jì)數(shù)
2. 白血病和淋巴瘤的免疫分型
3. 腫瘤的細(xì)胞周期和倍體分析
4. 網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)
5. 細(xì)胞移植的交叉配型和免疫狀態(tài)監(jiān)測(cè)
6. 干細(xì)胞計(jì)數(shù)
7. 殘量白血病細(xì)胞檢查
8. HLA-B27檢查
9. 血小板功能及相關(guān)疾病
科研應(yīng)用
1. 在免疫研究學(xué)中的應(yīng)用：
結(jié)合免疫熒光方法，流式細(xì)胞術(shù)可辨認(rèn)和計(jì)數(shù)帶有不同表面特異性抗原的細(xì)胞，以及研究各種外源凝集素與細(xì)胞表面結(jié)合的競(jìng)爭(zhēng)性等。
2. 在神經(jīng)生物學(xué)研究中的應(yīng)用：神經(jīng)干細(xì)胞和神經(jīng)祖細(xì)胞的特性研究；不同類型的神經(jīng)細(xì)胞的鑒定和功能研究；檢測(cè)細(xì)胞活性，細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期等。
3. 在腫瘤研究中的應(yīng)用：
流式細(xì)胞術(shù)可在實(shí)驗(yàn)和臨床中評(píng)價(jià)腫瘤化療和放療的作用，現(xiàn)在根據(jù)流式細(xì)胞術(shù)和細(xì)胞動(dòng)力學(xué)數(shù)據(jù)來監(jiān)視腫瘤治療的工作已經(jīng)在實(shí)際工作中開展起來。
4. 在細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)研究中的應(yīng)用：
流式細(xì)胞術(shù)可用于測(cè)定細(xì)胞周期各時(shí)相細(xì)胞的百分比。
用流式細(xì)胞術(shù)可進(jìn)行多參數(shù)分析，即同時(shí)測(cè)定一個(gè)細(xì)胞的多種性質(zhì)。
5. 在高通量監(jiān)測(cè)和新藥研發(fā)中的應(yīng)用：細(xì)胞功能變化的研究；細(xì)胞周期和活性；新藥研發(fā)；培養(yǎng)基研發(fā)等。
6. 海洋生物學(xué)：富集和分析細(xì)菌、藻類、浮游植物等。
7. 微生物學(xué)：細(xì)菌和酵母檢測(cè)；熒光蛋白檢測(cè)。
8. 生物燃料
9. 遺傳學(xué)研究：
用流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定染色體DNA含量,可得到染色體頻率分布圖
【實(shí)驗(yàn)方法】
Step1：制成單細(xì)胞懸液（組織樣本）
Step2：溶血（細(xì)胞樣本無需進(jìn)行此步驟）
Step3：離心去上清
Step4：調(diào)整細(xì)胞密度
Step5：加入相應(yīng)的標(biāo)記抗體
Step6：孵育
Step7：洗滌后離心去上清
Step8：上機(jī)檢測(cè)
【樣本送檢要求】
【案例展示】
【常見問題】
1. 待測(cè)樣本量至少lml，樣本應(yīng)在采集后6h內(nèi)處理，不可使用冷凍的標(biāo)本或溶血樣本。
2. 細(xì)胞活性要好，否則易發(fā)生非特異性熒光染色。
3. 確保標(biāo)本上機(jī)檢測(cè)前的細(xì)胞濃度為1×106／ml，細(xì)胞濃度過低則直接影響檢測(cè)結(jié)果。
4. 操作方面，保證流式細(xì)胞儀在整個(gè)工作過程中處于最佳狀態(tài)，能保證定量檢測(cè)的準(zhǔn)確性和檢測(cè)精度。使用標(biāo)準(zhǔn)樣品調(diào)整儀器的變異系數(shù)在最小范圍，分辨率在最好狀態(tài)，能避免在測(cè)量過程中儀器條件的變化引起的檢測(cè)誤差。
5. 在紅色熒光對(duì)藍(lán)色熒光散點(diǎn)圖上，還可見到細(xì)胞凋亡區(qū)向細(xì)胞壞死區(qū)遷移的軌跡，可能是凋亡細(xì)胞的DNA進(jìn)一步降解的緣故。
6. 用Heochst 33342染料與細(xì)胞孵育的時(shí)間不宜過長，一般控制在20min之內(nèi)為宜。如果太長可引起Heochst 33342的發(fā)射光譜由藍(lán)光向紅光的遷移，導(dǎo)致紅色熒光與藍(lán)色熒光的比例改變，從而影響結(jié)果的判斷。
【服務(wù)流程】
