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科研技術(shù)服務(wù)
【實驗原理】
流式細胞術(shù)(flow cytometry, FCM)是一項新型的、發(fā)展迅速的生物醫(yī)學(xué)分析技術(shù),它是集激光技術(shù)、光電測量技術(shù)、計算機技術(shù)、流體力學(xué)以及細胞免疫熒光化學(xué)技術(shù) 、單克隆抗體技術(shù)為一體的新型高科技細胞分析技術(shù)。
流式細胞儀使細胞或微粒在液流中流動,逐個通過一入射光束,并用高靈敏度檢測器記錄下散射光及各種熒光信號,從而得以對粒子進行多參數(shù)分析,包括諸如粒子形狀和大小、細胞周期、細胞內(nèi)細胞因子、細菌表面抗原、細胞DNA內(nèi)含物等。FCM檢測的粒子一般為活性細胞,通過激光光源激發(fā)細胞上所標記的熒光物質(zhì)的強度和顏色以及散射光的強度可以得到細胞內(nèi)部各種各樣的生物信息。另外FCM還可進行細胞分選,可以根據(jù)所檢測細胞的某種性質(zhì)進行分選,并且如果分選的過程是在無菌條件下進行的,這些細胞還可以用來培養(yǎng)。
【應(yīng)用簡介】
醫(yī)學(xué)應(yīng)用
1. HIV免疫分型，CD4絕對計數(shù)
2. 白血病和淋巴瘤的免疫分型
3. 腫瘤的細胞周期和倍體分析
4. 網(wǎng)織紅細胞計數(shù)
5. 細胞移植的交叉配型和免疫狀態(tài)監(jiān)測
6. 干細胞計數(shù)
7. 殘量白血病細胞檢查
8. HLA-B27檢查
9. 血小板功能及相關(guān)疾病
科研應(yīng)用
1. 在免疫研究學(xué)中的應(yīng)用：
結(jié)合免疫熒光方法，流式細胞術(shù)可辨認和計數(shù)帶有不同表面特異性抗原的細胞，以及研究各種外源凝集素與細胞表面結(jié)合的競爭性等。
2. 在神經(jīng)生物學(xué)研究中的應(yīng)用：神經(jīng)干細胞和神經(jīng)祖細胞的特性研究；不同類型的神經(jīng)細胞的鑒定和功能研究；檢測細胞活性，細胞凋亡和細胞周期等。
3. 在腫瘤研究中的應(yīng)用：
流式細胞術(shù)可在實驗和臨床中評價腫瘤化療和放療的作用，現(xiàn)在根據(jù)流式細胞術(shù)和細胞動力學(xué)數(shù)據(jù)來監(jiān)視腫瘤治療的工作已經(jīng)在實際工作中開展起來。
4. 在細胞生物學(xué)和分子生物學(xué)研究中的應(yīng)用：
流式細胞術(shù)可用于測定細胞周期各時相細胞的百分比。
用流式細胞術(shù)可進行多參數(shù)分析，即同時測定一個細胞的多種性質(zhì)。
5. 在高通量監(jiān)測和新藥研發(fā)中的應(yīng)用：細胞功能變化的研究；細胞周期和活性；新藥研發(fā)；培養(yǎng)基研發(fā)等。
6. 海洋生物學(xué)：富集和分析細菌、藻類、浮游植物等。
7. 微生物學(xué)：細菌和酵母檢測；熒光蛋白檢測。
8. 生物燃料
9. 遺傳學(xué)研究：
用流式細胞術(shù)測定染色體DNA含量,可得到染色體頻率分布圖
【實驗方法】
Step1：制成單細胞懸液（組織樣本）
Step2：溶血（細胞樣本無需進行此步驟）
Step3：離心去上清
Step4：調(diào)整細胞密度
Step5：加入相應(yīng)的標記抗體
Step6：孵育
Step7：洗滌后離心去上清
Step8：上機檢測
【樣本送檢要求】
【案例展示】
【常見問題】
1. 待測樣本量至少lml，樣本應(yīng)在采集后6h內(nèi)處理，不可使用冷凍的標本或溶血樣本。
2. 細胞活性要好，否則易發(fā)生非特異性熒光染色。
3. 確保標本上機檢測前的細胞濃度為1×106／ml，細胞濃度過低則直接影響檢測結(jié)果。
4. 操作方面，保證流式細胞儀在整個工作過程中處于最佳狀態(tài)，能保證定量檢測的準確性和檢測精度。使用標準樣品調(diào)整儀器的變異系數(shù)在最小范圍，分辨率在最好狀態(tài)，能避免在測量過程中儀器條件的變化引起的檢測誤差。
5. 在紅色熒光對藍色熒光散點圖上，還可見到細胞凋亡區(qū)向細胞壞死區(qū)遷移的軌跡，可能是凋亡細胞的DNA進一步降解的緣故。
6. 用Heochst 33342染料與細胞孵育的時間不宜過長，一般控制在20min之內(nèi)為宜。如果太長可引起Heochst 33342的發(fā)射光譜由藍光向紅光的遷移，導(dǎo)致紅色熒光與藍色熒光的比例改變，從而影響結(jié)果的判斷。
【服務(wù)流程】
