首頁
科研技術(shù)服務(wù)
【實(shí)驗(yàn)原理】
利用熒光素酶與底物結(jié)合發(fā)生化學(xué)發(fā)光反應(yīng)的特性，把感興趣的基因轉(zhuǎn)錄的調(diào)控元件克隆在螢火蟲熒光素酶基因（firefly luciferase）的上游， 構(gòu)建成熒光素酶報(bào)告質(zhì)粒。然后轉(zhuǎn)染細(xì)胞，適當(dāng)刺激或處理后裂解細(xì)胞，測(cè)定熒光素酶活性。通過熒光素酶活性的高低判斷刺激前后或不同刺激對(duì)感興趣的調(diào)控元件的影響。
【應(yīng)用簡(jiǎn)介】
雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)通常用于以下研究方向:驗(yàn)證miR同mRNA靶向互作、驗(yàn)證miR同lncRNA靶向互作、啟動(dòng)子結(jié)構(gòu)分析、驗(yàn)證特定轉(zhuǎn)錄因子同其調(diào)控序列的作用等。
主要應(yīng)用領(lǐng)域
1、潛在啟動(dòng)子/啟動(dòng)子核心區(qū)域檢測(cè)；
2、潛在增強(qiáng)子/抑制子等調(diào)控子核心元件檢測(cè)；
3、啟動(dòng)子區(qū)可能的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)檢測(cè)；
4、啟動(dòng)子/增強(qiáng)子與轉(zhuǎn)錄因子的相互作用；
5、病毒/細(xì)胞相互作用；
6、藥物等化學(xué)誘導(dǎo)因素對(duì)啟動(dòng)子活性的調(diào)節(jié)（抑制或增強(qiáng)）；
7、射線等物理誘導(dǎo)因素對(duì)啟動(dòng)子活性的調(diào)節(jié)（抑制或增強(qiáng)）。
【實(shí)驗(yàn)方法】
【樣本送檢要求】
【案例展示】
【常見問題】
1、由于溫度對(duì)酶反應(yīng)有影響，所以測(cè)定時(shí)樣品和試劑均需達(dá)到室溫后再進(jìn)行測(cè)定。
2、Renilla熒光素酶檢測(cè)工作液后需配制后立即使用，不可配制成工作液后長(zhǎng)期保存。
3、Luciferase Assay Reagent II (LAR II)不能反復(fù)凍融，保證每次用同一批次的LAR II。配好的LAR II在-20度可穩(wěn)定一個(gè)月，在-70度 可穩(wěn)定一年。
4、試劑保存和使用時(shí)都應(yīng)避光。
5、為取得最佳測(cè)定效果，測(cè)定時(shí)，樣品和測(cè)定試劑混合后到測(cè)定前的時(shí)間應(yīng)盡量控制在相同時(shí)間內(nèi)（1-2秒）。
6、使用過程中切勿接觸操作屏（程序會(huì)被終止或取消）。
7、平時(shí)盡量不要移動(dòng)儀器，防止觸摸屏走位。
【服務(wù)流程】
